Messung der Enzymaktivität der Phosphoglyceratkinase

Creative Enzymes ist ein führender Dienstleister, der auf die Messung von Enzymaktivitäten spezialisiert ist. Durch die Untersuchung zahlreicher Enzymaktivitäten in den vergangenen Jahren hat Creative Enzymes umfassende Expertise aufgebaut und kann schnelle sowie qualitativ hochwertige Enzymaktivitäts-Assay-Services für alle Arten von Transferasen, wie z. B. die Phosphoglyceratkinase, bereitstellen.

Die Phosphoglyceratkinase (EC 2.7.2.3; PGK) ist ein Enzym, das die ATP-abhängige Phosphorylierung von 3-Phosphoglycerat (3-PG) zu 1,3-Bisphosphoglycerat (1,3-bisPG) katalysiert – eine reversible Reaktion, die Mg²⁺ als essenziellen Kofaktor erfordert. Das Enzym kommt in allen Organismen vor, wobei verschiedene Formen in unterschiedlichen intrazellulären Kompartimenten lokalisiert sind. In photosynthetischen Organismen spielt PGK eine Schlüsselrolle bei der Katalyse des Schritts, der auf die Kohlenstofffixierung im Calvin-Benson-Zyklus folgt. PGK ist zudem eines der beiden ATP-generierenden Enzyme der Glykolyse. Im gluconeogenetischen Stoffwechselweg katalysiert PGK die Rückreaktion, während unter biochemischen Standardbedingungen die glykolytische Reaktionsrichtung bevorzugt ist.

Die molekulare Struktur von PGK ist in allen bislang untersuchten Spezies stark konserviert. PGK ist ein monomeres Enzym mit zwei Domänen, einer N-terminalen und einer C-terminalen Domäne, die durch eine verbindende α-Helix (Linker) gekoppelt sind. Konformationsänderungen, die die Interaktionen zwischen den beiden Domänen steuern, initiieren den Transfer der Phosphatgruppe. Beim Menschen wird PGK in zwei Isoformen unterteilt, PGK1 und PGK2.

Ein PGK-Mangel wurde beim Menschen mit hämolytischer Anämie, neurologischen Störungen und Myopathie in Verbindung gebracht. Darüber hinaus wurde eine Überexpression von PGK1 mit Magenkarzinom assoziiert. Zudem spielt PGK aufgrund seiner breiten Spezifität gegenüber Nukleotidsubstraten eine entscheidende Rolle bei der Phosphorylierung und Aktivierung antiretroviraler HIV-Arzneimittel. Daher rückt PGK zunehmend in den Fokus von Pharmaunternehmen und biotechnologischen Instituten. Um die funktionelle Bedeutung von PGK zuverlässig zu untersuchen, ist eine präzise Überwachung der PGK-Aktivität erforderlich. Creative Enzymes bietet hierfür einen sorgfältig durchgeführten enzymatischen Assay für PGK an. Wir messen die PGK-Aktivität mittels einer gekoppelten Reaktion mit der Glycerinaldehyd-3-phosphat-Dehydrogenase aus dem vorhergehenden Schritt des glykolytischen Stoffwechselwegs. Der NADH-Verbrauch wird zeitabhängig durch Verfolgung der Absorption bei 340 nm überwacht. Die Dienstleistungen von Creative Enzymes zählen zu den vertrauenswürdigsten und am Markt bewährten Angeboten und wurden von zahlreichen Kunden ausdrücklich empfohlen. Creative Enzymes ist stets Ihr verlässlicher Partner und unterstützt weiterhin Ihr Ziel der Industrialisierung und Kommerzialisierung des Enzyms.

Abbildung: Die Kristallstruktur der E. coli-Phosphoglyceratkinase. Diese Struktur zeigt zwei globuläre Domänen, die N-Domäne (silber) und die C-Domäne (gold), verbunden durch einen α-Helix-Linker (braun).
Referenz: Young T A, Skordalakes E, Marqusee S. Journal of Molecular Biology, 2007, 368(5): 1438–1447.