Enzymaktivitätsmessung für Phosphoglyceratkinase

Creative Enzymes ist ein führender Dienstleister, der sich auf die Messung von Enzymaktivitäten spezialisiert hat. In den letzten Jahren hat Creative Enzymes zahlreiche Enzymaktivitäten getestet und umfangreiche Erfahrungen gesammelt, die schnelle und qualitativ hochwertige Enzymaktivitätsassay-Dienste für alle Arten von Transferasen, wie Phosphoglyceratkinase, bieten können.

Phosphoglyceratkinase (EC 2.7.2.3; PGK) ist ein Enzym, das die ATP-abhängige Phosphorylierung von 3-Phospho-Glycerat (3-PG) zu 1,3-Bisphosphoglycerat (1,3-bisPG) in einer reversiblen Reaktion katalysiert, die Mg²⁺ als essentielles Kofaktor erfordert. Das Enzym ist in allen Organismen vorhanden, wobei verschiedene Formen in unterschiedlichen intrazellulären Kompartimenten lokalisiert sind. In photosynthetischen Organismen spielt das PGK-Enzym eine entscheidende Rolle bei der Katalyse des Schrittes nach der Kohlenstofffixierung durch den Calvin-Benson-Zyklus. PGK dient auch als eines der beiden ATP-generierenden Enzyme in der Glykolyse. Im gluconeogenen Weg katalysiert PGK die umgekehrte Reaktion, während die glykolytische Richtung unter biochemischen Standardbedingungen bevorzugt wird.

Die molekulare Struktur von PGK ist in allen bisher untersuchten Arten stark konserviert. PGK ist ein monomeres Enzym mit zwei Domänen, einer N-terminalen Domäne und einer C-terminalen Domäne, die durch eine Linker-α-Helix verbunden sind. Konformationsänderungen, die die Wechselwirkungen zwischen den beiden Domänen steuern, initiieren den Transfer der Phosphatgruppe. Bei Menschen wird PGK in zwei Isoformen unterteilt, PGK1 und PGK2.

Ein PGK-Mangel wurde mit hämolytischer Anämie, psychischen Störungen und Myopathie bei Menschen in Verbindung gebracht. Darüber hinaus wurde festgestellt, dass die Überexpression von PGK1 mit Magenkrebs in Zusammenhang steht. Darüber hinaus spielt PGK auch eine entscheidende Rolle bei der Phosphorylierung und Aktivierung von HIV-Antiretroviralen Medikamenten aufgrund seiner breiten Spezifität gegenüber Nukleotidsubstraten. Daher erhält PGK zunehmend Aufmerksamkeit von Pharmaunternehmen und biotechnologischen Instituten. Um die funktionale Bedeutung von PGK reibungslos zu untersuchen, ist es notwendig, die Aktivität von PGK genau überwachen zu können. Hier bietet Creative Enzymes den sorgfältigen enzymatischen Assay für PGK an. Wir messen die PGK-Aktivität unter Verwendung der gekoppelten Reaktion mit Glycerinaldehyd-3-phosphat-Dehydrogenase aus dem vorherigen Schritt des glykolytischen Weges. Der NADH-Verbrauch wird als Funktion der Zeit überwacht, indem die Absorption bei 340 nm verfolgt wird. Die Dienste von Creative Enzymes sind die vertrauenswürdigsten und bewährtesten auf dem Markt und wurden von vielen Kunden gelobt. Creative Enzymes wird immer Ihr vertrauenswürdiger Partner sein und weiterhin Ihr Ziel der Industrialisierung und Kommerzialisierung des Enzyms unterstützen.

Abbildung: Die Kristallstruktur der E. coli Phosphoglyceratkinase. Diese Struktur zeigt das Vorhandensein von zwei globulären Domänen, N-Domäne (silber) und C-Domäne (gold), die durch einen α-Helix-Linker (braun) verbunden sind.
Referenz: Young T A, Skordalakes E, Marqusee S. Journal of molecular biology, 2007, 368(5): 1438-1447.