Enzymaktivitätsmessung von Polypeptid N-Acetylgalactosaminyltransferase

Creative Enzymes hat in den letzten Jahren bedeutende Erfolge bei Enzymaktivitätsassays erzielt, dank der Etablierung standardisierter Protokolle und strenger Qualitätskontrollen. Diese Vorteile resultieren aus der umfassenden Entwicklung von Fachwissen und einer professionellen Einstellung. Die umfangreiche Erfahrung, die aus Tausenden von abgeschlossenen Tests gewonnen wurde, wird zu geeigneten Ansätzen zur Aktivitätsmessung für jede Transferase führen, einschließlich der Polypeptid N-Acetylgalactosaminyltransferase.

Polypeptid N-Acetylgalactosaminyltransferase (pp-GalNAc-T, EC 2.4.1.40) katalysiert die Anheftung eines Monosaccharids, N-Acetylgalactosamin (GalNAc), an die Hydroxylgruppe einer Serin- oder Threonin-Rest auf einem Zielprotein oder Polypeptid und setzt das UDP-Molekül frei. Diese Reaktion ist ein einleitender Prozess der Biosynthese des O-Glykans von Glykoproteinen. Die katalysierte Reaktion benötigt die Teilnahme von sowohl Mangan- als auch Calciumionen als Kofaktoren.

Die pp-GalNAc-Ts sind eine große Familie mit vielen Isoformen. Bis heute wurden 15 menschliche pp-GalNAc-Ts, bezeichnet als pp-GalNAc-T1 bis pp-GalNAc-T15, berichtet. Diese Enzyme sind alle Typ-II-Membranproteine mit primären Strukturen, die den anderen in den Glykosyltransferasen ähnlich sind. Biochemische Analysen deuten darauf hin, dass diese Domäne bei der Übertragung von GalNAc auf Glykoproteine, jedoch nicht auf Peptidsubstrate, funktioniert. Aufgrund der Hauptfunktionen bei der Modulation der Proteinverarbeitung hat dieses Enzym großes Potenzial in der Arzneimittelentwicklung, der Krebsforschung und der Molekularbiologie. Für die Arzneimittelentwicklung ist dieses Enzym von Bedeutung für Einblicke in die O-Glykosylierungsverarbeitung und die Festlegung geeigneter Säugetier-Expressionssysteme für rekombinante Arzneimittel-Glykoproteine. Für die Krebsforschung ist dieses Enzym ein neues Werkzeug zur Untersuchung von Veränderungen der Motif-Peptid O-Glykosylierung in pathologischen Situationen. Für die Molekularbiologie unterstützt die heterologe Expression dieses Enzyms die Studien zur in vitro Glykosylierung. Die genauen Ergebnisse von Aktivitätsassays sind jedoch aufgrund des Mangels an geeigneten Testmethoden für spezifische Reaktionsbedingungen schwierige Aufgaben. Creative Enzymes verfügt über große Analyseplattformen, die alle Forschungsanforderungen erfüllen können.

Abbildung: Die Kristallstruktur des menschlichen pp-GalNAc-T10 mit UDP, GalNAc und Mn²⁺.
Referenz: Kubota T et al. J Mol Biol. 2006 359(3): 708-27.

Creative Enzymes setzt alles daran, überlegene Dienstleistungen für Enzymaktivitätsassays anzubieten. Unser Kernwert, auf die beste Qualität zu bestehen, hat sich seit der Gründung des Unternehmens nie geändert. In Zukunft wird Creative Enzymes weiterhin erstklassige Assays anbieten und gemeinsam mit unseren Kunden wachsen.