Messung der Enzymaktivität der Polypeptid‑N‑Acetylgalactosaminyltransferase

Creative Enzymes hat in den vergangenen Jahren aufgrund der Etablierung standardisierter Protokolle und strenger Qualitätskontrollen herausragende Erfolge bei Enzymaktivitätsassays erzielt. Diese Vorteile beruhen auf einer fundierten Kompetenzentwicklung und einer professionellen Arbeitsweise. Die umfangreichen Erfahrungen aus Tausenden abgeschlossener Prüfungen ermöglichen die Auswahl geeigneter Ansätze zur Aktivitätsmessung für jede Transferase, einschließlich der Polypeptid‑N‑Acetylgalactosaminyltransferase.

Die Polypeptid‑N‑Acetylgalactosaminyltransferase (pp‑GalNAc‑T, EC 2.4.1.40) katalysiert die Übertragung eines Monosaccharids, N‑Acetylgalactosamin (GalNAc), auf die Hydroxylgruppe eines Serin‑ oder Threoninrests eines Zielproteins bzw. ‑polypeptids unter Freisetzung eines UDP‑Moleküls. Diese Reaktion stellt einen Initiationsschritt der Biosynthese von O‑Glykanen in Glykoproteinen dar. Für die katalysierte Reaktion ist die Beteiligung von Mangan‑ und Calciumionen als Kofaktoren erforderlich.

Die pp‑GalNAc‑Ts bilden eine große Enzymfamilie mit zahlreichen Isoformen. Bis heute wurden 15 humane pp‑GalNAc‑Ts beschrieben, bezeichnet als pp‑GalNAc‑T1 bis pp‑GalNAc‑T15. Diese Enzyme sind sämtlich Typ‑II‑Membranproteine mit Primärstrukturen, die denen anderer Glykosyltransferasen ähneln. Biochemische Analysen deuten darauf hin, dass diese Domäne die Übertragung von GalNAc auf Glykopeptide, nicht jedoch auf Peptidsubstrate, vermittelt. Aufgrund ihrer zentralen Rolle bei der Modulation der Proteinprozessierung besitzt dieses Enzym ein hohes Potenzial für die Arzneimittelentwicklung, die Krebsforschung und die Molekularbiologie. In der Arzneimittelentwicklung ist dieses Enzym bedeutsam für das Verständnis der O‑Glykosylierungsprozesse sowie für die Auswahl geeigneter Säuger‑Expressionssysteme zur Herstellung rekombinanter Arzneistoff‑Glykoproteine. In der Krebsforschung stellt es ein neues Werkzeug zur Untersuchung von Veränderungen der Motivpeptid‑O‑Glykosylierung in pathologischen Situationen dar. In der Molekularbiologie unterstützt die heterologe Expression dieses Enzyms Studien zur in vitro‑Glykosylierung. Präzise Ergebnisse in Aktivitätsassays sind jedoch anspruchsvoll, da geeignete Assay‑Methoden für spezifische Reaktionsbedingungen häufig fehlen. Creative Enzymes verfügt über umfassende Analyseplattformen, die sämtliche Forschungsanforderungen abdecken können.

Abbildung: Kristallstruktur der humanen pp‑GalNAc‑T10 mit UDP, GalNAc und Mn²⁺.
Referenz: Kubota T et al. J Mol Biol. 2006 359(3): 708-27.

Creative Enzymes setzt alles daran, erstklassige Dienstleistungen für Enzymaktivitätsassays bereitzustellen. Unser Kernwert, konsequent höchste Qualität zu gewährleisten, ist seit der Gründung des Unternehmens unverändert. Auch künftig wird Creative Enzymes weiterhin erstklassige Assays anbieten und gemeinsam mit unseren Kunden wachsen.